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測定原理

AC900+三分群血液分析儀采用電阻抗法，檢測原理是：根據(jù)血細胞相對非導電的性質，懸浮有電解質溶液中的血細胞顆粒，在通過計數(shù)小孔時可引起電阻的變化為基礎，對血細胞進行計數(shù)和體積測定。

1、檢測原理：將等滲電解質溶液（被稱為稀釋液,diluents）稀釋的細胞懸液置入一個不導電的容器中，將小孔管(也稱傳感器transducer)插到細胞懸液中。小孔管是電阻抗法細胞計數(shù)的一個重要的組成部分，其內(nèi)側充滿了稀釋液，并有一個內(nèi)電極，外側細胞懸液中有一個外電極。檢測期間，當電源接通后，位于小孔兩側的電極產(chǎn)生穩(wěn)定的電流；稀釋液通過小孔的管壁上固有的小孔（直徑一般<100μm.厚度為75μm左右）向小孔內(nèi)部流動。此時，小孔周圍充滿了具有導電性的液體，其電子脈沖是穩(wěn)定的。如果供給電流I和阻抗R是穩(wěn)定的，根據(jù)歐姆定律通過小孔的電壓V是不變的（這時V=IR）。當有細胞通過小孔時，由于細胞的導電性質比稀釋液要低，在電路中小孔感應區(qū)內(nèi)的電阻的增加，于是瞬間引起了電壓變化而出現(xiàn)一個脈沖信號。電壓增加的變化的程度取決于非傳導的細胞占據(jù)小孔感應區(qū)的體積，即細胞體積越大，引起的脈沖越高，產(chǎn)生的脈沖振幅越高，測定脈沖的大小即可測出細胞體積大小，記錄脈沖的數(shù)量就可測定細胞的數(shù)量。。脈沖信號經(jīng)過下列步驟，得出細胞計數(shù)結果。

（1）信號發(fā)生器：通過小孔的各種血細胞都能產(chǎn)生電阻信號，信號電平的高低與細胞的大小成正比。

（2）放大：由于血細胞通過微孔時產(chǎn)生的脈沖訊號非常微弱，不能直接觸發(fā)計數(shù)電路，因此必須通過電子放大器，將微伏訊號放大為伏級脈沖訊號。

（3）閾值調節(jié)：在計數(shù)不同細胞時，應調節(jié)閾值電平，以給出合適的閾值度，使計數(shù)結果盡量符合實際水平。

（4）甄別：通過微孔時的各種微粒（血細胞、細胞碎片、雜質等）均可產(chǎn)生相應脈沖訊號，訊號電平（脈沖幅度）與微粒大小成正比。因除血細胞外，血中細胞外，血中細胞碎片、稀釋液中雜質微粒均可產(chǎn)生假訊號，使計數(shù)結果偏高。所謂甄別就是利用甄別器根據(jù)閾值調節(jié)器提供的參考電平，將低于參考電平的假訊號去掉，以提高細胞計數(shù)的準確性。

（5）整形器：經(jīng)過放大和甄別后的細胞脈沖訊號波形尚不一致必須經(jīng)過整形器作用，修整為形伏一致標準的平頂波后，才能觸發(fā)電路。

（6）計數(shù)：血細胞的脈沖信號，經(jīng)過放大、甄別、整形后，送入計數(shù)系統(tǒng)；血液分析儀對大小不同的脈沖進行選擇，區(qū)分出不同類型的細胞并分別進行計數(shù)。

2、白細胞計數(shù)和分類計數(shù)原理：根據(jù)電阻抗的原理，不同體積的白細胞通過小孔時產(chǎn)生的脈沖大小有明顯的差異，依據(jù)這些脈沖的大小，可對白細胞進行分群。

經(jīng)過溶血劑處理后的白細胞可以根據(jù)體積大小初步確認其相應的細胞群：第一群是小細胞區(qū)(LYMF)，指細胞體積在35-90fl之間的小細胞區(qū)，主要分布的是淋巴細胞；第二群是單個核細胞區(qū)，也被稱為中間細胞（MID），指細胞體積在90-160fl之間的中間細胞區(qū)，主要包括單核細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞，核左移的各階段幼稚細胞或白血病時白血細胞。。第三群是大細胞區(qū)，主要是中性粒細胞（GRAN），指細胞體積在160fl以上的大細胞區(qū)，主要分布的是中性粒細胞。儀器根據(jù)各亞群占總體的比例計算出各亞群的百分率，如果與該標本的白細胞總數(shù)相乘，即得到各類細胞的絕對值?？梢钥闯?，電阻法只是根據(jù)細胞體積的大小，將白細胞分成幾個群體。

3、紅細胞數(shù)和血細胞比容測定：絕大多數(shù)血液分析儀使用電阻抗法進行紅細胞計數(shù)和紅細胞比積測定，其原理同白細胞一樣。紅細胞通過小孔時，形成的相應的脈沖的多少即紅細胞的數(shù)目，脈沖的高度代表單個脈沖細胞的體積。脈沖高度疊加經(jīng)換算即可得到紅細胞的比容。稀釋的血液進入紅細胞檢測通道時，其中含有白細胞，因此，紅細胞檢測的各項參數(shù)均含有白細胞因素，但正常血液有形成分中白細胞比例很少約為500：1-700：1，故其影響可忽略不計，但在病理情況下，如白血病，白細胞數(shù)明顯增加而又伴嚴重貧血時，即可使所得各項參數(shù)產(chǎn)生明顯誤差。血細胞比容，通常用紅細胞平均體積（MCV）與紅細胞相乘得出紅細胞比積HCT=MCV×RBC。

4、血紅蛋白測定：當稀釋的血液加入溶血劑后，紅細胞溶解并釋放血紅蛋白，Hb與溶血劑中的某些成分結合形成血紅蛋白衍生物，進入血紅蛋白測試系統(tǒng)，在特定波長（一般在530-550nm）下比色；吸光度的變化與液體中Hb含量成比例，儀器便可顯示HGB濃度。不同系列血液分析儀配套溶血劑配方不同，形成的血紅蛋白衍生物亦不同，吸光度各異但最大吸收峰均接近540nm .這是因為ICSH推薦的氰化高鐵法，HICN最大吸收峰在540nm。校正儀器必須以HICN值為標準。大多數(shù)系列血液分析儀溶血劑內(nèi)均含有氰化鉀，與血紅蛋白作用后形成氰化血紅蛋白（注意不是氰化高鐵血紅蛋白），其特點是顯色穩(wěn)定，最大吸收峰接近540nm，但吸收光譜與HICN有明顯的不同。此點在血液分析儀校正時應十分注意。

5、紅細胞其他參數(shù)的檢測：　紅細胞平均值，如紅細胞平均體積（MCV）、平均紅細胞血紅蛋白量（MCH）、平均紅細胞血紅蛋白濃度（MCHC）、均是根據(jù)儀器檢測導出（MCV），或由檢測的紅細胞數(shù)和血紅蛋白含量的檢測數(shù)據(jù)，經(jīng)計算得到，MCH=HGB÷RBC　MCHC=HGB÷HCT HCT=MCV×RBC。紅細胞體積分布寬度（RDW）則是由血液分析儀測量細胞體積后獲得的，是反映外周血紅細胞體積異質性的參數(shù)，即反映紅細胞大小不等的客觀指標。當紅細胞通進小孔的一瞬間，計數(shù)電路得到一個相應的大小的脈沖，脈沖的高度是由細胞體積大小決定的，不同大小的脈沖的信號分別貯存在儀器內(nèi)裝計算機的不同通道內(nèi)，計算出相應的體積及細胞數(shù)后，統(tǒng)計處理而得RDW 值。由于RDW 來自十幾秒內(nèi)近萬個紅細胞的檢測數(shù)據(jù)，不但可以克服測量紅細胞直徑時人為制片因素和主觀因素等影響。

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6、電阻抗法血小板檢測原理  血小板（platelet, PLT）隨紅細胞一起在一個系統(tǒng)中進行檢測，當各種細胞引起電阻變化，產(chǎn)生的脈沖經(jīng)數(shù)字化后，根據(jù)不同的閾值，計算機分別給出血小板和紅細胞數(shù)目。血小板分別儲存于64個通道，直方圖范圍在2-28fl，。血小板平均體積（mean platelet volume, MPV）就是PLT體積分布的直方圖的產(chǎn)物。